В диференциалното определяне на ентеробактерии и някои вибриони реакцията на Фогес-Проскауер заема специално място. Тестът се основава на способността на бактериите да ферментират глюкозата, за да образуват ацетоин.
Същността на изследователския процес
В микробиологията реакцията на Voges-Proskauer често се използва за диференциране в рамките на семейството Yersinia на ентеробактериите (включително патогените на псевдотуберкулоза и ентероколит), Escherichia coli и спорообразуващи аероби. Резултатът се визуализира чрез оцветяване на средата, когато се добавят определени реагенти.
Този тест принадлежи към серията IMViC (съкращение от Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - група тестове за идентификация, включващи диференциални дефиниции:
- с индол, на базата на разграждането на триптофана в индол, използван в присъствието на реагент на Ковач или Ерлих;
- използванеметилрот или метил червено, което открива дадено рН в резултат на метаболизма на глюкозата;
- Реакции на Voges-Proskauer за откриване на ацетил-метилкарбинол;
- използване на цитрат с промяна на цвета в резултат на алкализиране на средата.
Същността на процеса е визуализирането на наличието на диагностицирани бактерии поради взаимодействието на образувания от тях ацетоин с каустик поташ в присъствието на кислород. Ацетил-метилкарбинолът се окислява до диацетил, който образува ярко червено или розово съединение. Увеличете чувствителността на теста чрез въвеждане на алфа-нафтол преди добавяне на каустик поташ.
Тестова настройка
Формулирането на реакцията на Фогес-Проскауер включва предварително култивиране на микроорганизми. Върху диференциално-диагностичната среда на Кларк се засява чиста култура, чийто вариант е бульонът на Кларк (без добавяне на агар-агар). Използва се или готова среда, или приготвена самостоятелно. Съставките включват:
- 5g пептон;
- 5g глюкоза;
- 5g двуосновен калиев фосфат;
- 1L дестилат.
По време на изследването културата се инокулира със стерилна бактериологична примка в течна среда. Количество - 5 ml в епруветка плюс контрола. Инкубацията се извършва при температура 35-37 градуса в продължение на два дни. След това се извършва изследване на реакцията на Voges-Proskauer на етапи:
- 2, 5 ml бульонна култура се прехвърлят в стерилна епруветка.
- Добавете шест капки алфа-нафтол (5% алкохолен разтвор).
- Добавяне на 40%разтвор на каустик калий в количество от 0,1 ml, или две капки.
- Разбъркването се извършва чрез леко разклащане на епруветката.
- Оценете резултата след 15 минути от началото на експеримента.
Алтернативен метод за тестване е инкубацията за една нощ, времето на която се намалява до 18 часа или до един ден. В допълнение към този метод се използва и експресен тест: култура се въвежда в примка в 2 ml от средата, инкубира се за около четири часа, след което се добавят реагенти в равно количество от 2-3 капки, смесват се и резултатът се оценява след десет минути.
Контролът е един от причинителите на пневмония Klebsiella pneumoniae - щам atcc 13883.
Оценка на резултата
След необходимото време след добавяне на реагентите (от 5 до 15 минути) трябва да се наблюдава черешово-червен цвят с изразена положителна реакция, червено и розово - при слаба положителна реакция. Никаква промяна не се записва като отрицателен резултат.
Излишъкът от каустик поташ в разтвор може да даде имитация на положителна реакция, оцветяване в меден цвят. В този случай трябва да се регистрира отрицателният отговор на изследваната колония. Също така, оцветяване с мед се появява в случаите, когато оценката се дава час след въвеждането на реагентите.
При оценка на резултата трябва да се има предвид, че продължителното култивиране на изследваните микроорганизми (повече от три дни) води до подкиселяване на средата, което може да доведе до неправилен резултат от изследването. Реакцията може да бъде слабо положителна илифалшиво отрицателно.
Изисквания за тестови реагенти
Реагентите на Voges-Proskauer трябва да отговарят на изисквания като правилна концентрация, висока чистота и стабилност, което се постига чрез правилно съхранение.
Готовите за употреба тестови комплекти обикновено съдържат реагенти за 100 или повече употреби и се предлагат в пластмасови или оцветени стъклени флакони. Качеството се регулира от съответната документация.
