Разнообразието от бактериални инфекции изисква ясна идентификация на патогена и определяне на неговия вид. За да определят вида на микроорганизма, на микробиолозите помагат неговите тинкториални свойства - податливостта на микроба към оцветяване с различни багрила. Този метод ви позволява да проучите морфологията на патогена. Тинкториалните свойства на бактериите са от голямо значение за практическите и теоретичните изследвания в областта на микробиологията.
Микробни изследвания
В бактериологията има много методи за оцветяване на микроорганизми. Всички те се основават на тинкториалните свойства на бактериите. Оцветяването ви позволява да определите тяхната форма, структура, размер, относително положение. Това позволява решаването на задачите за систематизиране на видовете микроорганизми от обща биология и сравнителна микробиология.
Защо да ги боядисате
Бактериите са практическипрозрачни организми и без използване на оцветяване, те са слабо видими за конвенционална микроскопия. Можете да използвате специални видове микроскопия (фазов контраст, тъмно поле) за изследване на обекти, но най-лесният начин е да оцветите, след което бактериите стават видими в конвенционален светлинен микроскоп.
Приготвяне на проба
Независимо от използваната техника на оцветяване, има единни правила за подготовка на изследвания обект. Следните етапи са задължителни:
- Стерилните инструменти правят намазка върху предметно стъкло.
- Пробата се суши. Това се прави при стайна температура или с помощта на сушилни шкафове.
- Следва етапа на фиксиране - микроорганизмите се прикрепят към стъклото със специални съединения.
- Правилно оцветяване - пробата се покрива с боя за определен период от време, след което се отмива.
- Окончателно сушене - пробата се изсушава отново.
Най-често срещаните багрила
Най-често използваните багрила са на базата на анилин с различни киселинни стойности (рН). Повечето багрила са прахове, които се разреждат в алкохол.
Багрилата, в които катиони са оцветяващи агенти, се наричат основни (рН по-голямо от 7). Те могат да се използват за оцветяване на микроорганизми в червено (пурпурно, сафранин), виолетово (метил виолетово, тионин), синьо (метиленово синьо), зелено (малахитно зелено), кафяво (хризоидин) и черно (индулин) цветове.
Боите, в които оцветителите са аниони, се наричат киселинни (рН по-малко от 7). Те ще оцветят пробата в червено (еозин), жълто (пикрин) или черно (нигрозин).
Има група неутрални багрила (например родамин B), където и катиони, и аниони действат като оцветители.
Култура мъртва или жива
Методите за оцветяване са разделени на две групи в зависимост от формата на живот на тестовия образец.
- Витално (доживотно) оцветяване. Този метод за изследване на свойствата на микроорганизмите се използва при изследване на живи тъкани, което дава възможност да се наблюдават жизнените процеси на микробите. За това оцветяване се използват багрила с ниска токсичност и висока проникваща способност.
- Поствитално оцветяване. Това е оцветяването на мъртви или убити микроорганизми. Благодарение на тинкториалните свойства на бактериите, микробиолозите определят тяхната структура. Именно това оцветяване се използва най-широко.
Грам-положителни и Грам-отрицателни
Именно тези характеристики на бактериите могат да бъдат намерени в инструкциите за различни лекарства. Този метод за изследване на тинкториалните свойства на бактериите се основава на използването на багрило от генциан виолетово и йодно фиксиране. Това е техниката на Ханс Кристиан Грам, датски лекар, който я предлага през 1884 г. В резултат на това оцветяване бактериите се разделят на две групи:
- Gram (+) - става синьо(стафилококи и стрептококи).
- Gram (-) - оцветяване от розово до червено (ентеробактерии, салмонела, E. coli).
Различните резултати от оцветяване се дължат на различните тинкториални свойства на бактериалните стени. Методът за оцветяване по Грам все още е основният при диагностицирането на някои инфекциозни заболявания.
Други техники за оцветяване
Нека характеризираме още няколко метода, широко използвани в бактериологията.
Метод
Могат да се видят спори
Оцветяването на Циел с фучин ви позволява да видите бактериални спори. Имайки розов цвят след оцветяване, те са ясно видими на фона на сини бактерии. Този метод също е инструмент на бактериологията и е от голямо практическо значение.
